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ELISA試驗操作失敗的主要原因
  • 發(fā)布日期:2019-12-16      瀏覽次數:1537
    • 我們知道,ELISA測定中影響要素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在查驗中除正常反響外,有時(shí)??梢?jiàn)到一些過(guò)錯結果(即假陽(yáng)性或假陰性),那么致使試驗不成功的主要原因有哪些咧?

       

      :標本的影響:

      溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易發(fā)生假陽(yáng)性?;蛟S是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋 白中的亞鐵血紅素),在洗刷過(guò)程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,發(fā)生假陽(yáng)性。所以嚴峻溶血標本禁用。  

        

      二、標本受細菌污染:

      因菌體中或許含有內源性辣根過(guò)氧化物酶,因而,被細菌污染的標本同溶血標本相同,亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾 測定結果。

       

      三、標本保存不妥:

      在冰箱中保存過(guò)久的標本,在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、形成假陽(yáng)性;為克服上述攪擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能立即測定,5d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應充沛混合后再測定,但混勻時(shí)應輕柔,不可強烈振動(dòng)。    

       

      四、標本凝結不全:

      在工作中,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測,常在血液還未開(kāi)始凝結時(shí)即強行離心別離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過(guò)程中能夠形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易形成假陽(yáng)性結果;因而血液標本收集后有必要使其充沛凝結后再別離血清。