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脂質(zhì)體細胞轉染的方法
  • 發(fā)布日期:2024-10-21      瀏覽次數:182
    • 1、脂質(zhì)體轉染法

      陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用,將DNA分子包裹入內,形成DNA脂復合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過(guò)融合或細胞內吞進(jìn)入細胞。脂質(zhì)體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中,是目前實(shí)驗室轉染方法之一,其轉染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法。

      2、磷酸鈣共沉淀法

      該方法可重復性差,而且磷酸鈣溶液對溫度、pH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感,對細胞尤其是原代細胞毒性較大,也不能采用RPMI培養基,因為其含有高濃度的磷酸鹽。

      3、電穿孔轉染法

      電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時(shí)的小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內,這種方法就是電穿孔。
      當遇到某些脂質(zhì)體轉染效率很低或幾乎無(wú)法轉入時(shí)可以用電穿孔法轉染。
      一般情況下,高電場(chǎng)強度會(huì )殺死50%-70% 的細胞?,F在針對細胞死亡開(kāi)發(fā)出了一種電轉保護劑,可以大大的降低細胞的死亡率,同時(shí)提高電穿孔轉染效率。

      4、病毒感染

      對于脂質(zhì)體轉染與電穿孔轉染都無(wú)法成功轉染的細胞系可以采用病毒感染,腺病毒,腺相關(guān)病毒,逆轉錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動(dòng)物細胞體內外的基因轉染,轉染效率比較高,適用于較難轉染的細胞。
      但是插入的片段長(cháng)度有一定限制,最重要的是技術(shù)難度比較高,在一般實(shí)驗室中很難普及,而且某些病毒起效時(shí)間比較慢,跟不上細胞這種快速繁殖的速度,如果只是做簡(jiǎn)單細胞系的轉染性?xún)r(jià)比不高。

      沒(méi)有一種方法適用于所有的細胞和實(shí)驗,理想的方法應根據細胞類(lèi)型和實(shí)驗需要進(jìn)行選擇,如果只是在細胞水平做,而且用的是簡(jiǎn)單細胞系,那么脂質(zhì)體轉染是綜合比較起來(lái)不錯的一個(gè)方法。